一種性能改進(jìn)的重組金黃色葡萄球菌蛋白A親和配基及其構(gòu)建方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201310097553.9 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN103214563B 公開(kāi)（公告）日 2015-09-30
申請(qǐng)公布號(hào) CN103214563B 申請(qǐng)公布日 2015-09-30
分類(lèi)號(hào) C07K14/31(2006.01)I;C12N15/31(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12R1/445(2006.01)N 分類(lèi) 有機(jī)化學(xué)〔2〕;
發(fā)明人 夏海鋒;吳璞強(qiáng);梁振東;王沙莉;鄭夢(mèng)杰 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人 嘉興千純生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) - 代理人 -
地址 214122 江蘇省無(wú)錫市蠡湖大道1800號(hào)江南大學(xué)生物工程學(xué)院
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開(kāi)了一種性能改進(jìn)的重組金黃色葡萄球菌蛋白A親和配基及其構(gòu)建方法。本發(fā)明利用分子生物學(xué)方法，選取天然蛋白A的B序列進(jìn)行分子改造，在B序列的C端添加2個(gè)半胱氨酸，從而可以將蛋白A通過(guò)雙位點(diǎn)偶聯(lián)的層析基質(zhì)，使連接更加穩(wěn)定，在B序列第二個(gè)Loop后面添加了6個(gè)甘氨酸增加其長(zhǎng)度，降低與抗體之間的結(jié)合力，從而使洗脫條件更加溫和。在此基礎(chǔ)上對(duì)蛋白A耐高濃度堿的性能進(jìn)行改造，將B序列第23、30位的天冬酰胺和苯丙氨酸分別替換成蘇氨酸和丙氨酸，得到耐堿性能更高的Z序列。然后，利用同尾酶將不同數(shù)量的Z序列首尾串聯(lián)，并利用大腸桿菌的高效表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行過(guò)量表達(dá)。將表達(dá)的重組蛋白A偶聯(lián)到瓊脂糖基質(zhì)制備親和層析填料，并用于純化抗體，結(jié)果表明本發(fā)明制備的重組蛋白A親和配基具有較好的洗脫性能和耐堿性能。