一種重組載體CAR-CD244-antiPSMA的制備方法
基本信息
| 申請(qǐng)?zhí)?/td> | CN201810984124.6 | 申請(qǐng)日 | - |
| 公開(kāi)（公告）號(hào) | CN109097401B | 公開(kāi)（公告）日 | 2021-09-07 |
| 申請(qǐng)公布號(hào) | CN109097401B | 申請(qǐng)公布日 | 2021-09-07 |
| 分類號(hào) | C12N15/867;C12N5/10;C12N15/62;A61K35/17;A61P35/00 | 分類 | 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程; |
| 發(fā)明人 | 顧雨春;尹樂(lè) | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 | 北京呈諾醫(yī)學(xué)科技有限公司 |
| 代理機(jī)構(gòu) | 北京衛(wèi)平智業(yè)專利代理事務(wù)所（普通合伙） | 代理人 | 謝建玲;郝亮 |
| 地址 | 102600 北京市大興區(qū)經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)科創(chuàng)十三街18號(hào)院13號(hào)樓3層301 | ||
| 法律狀態(tài) | - | ||
摘要
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種重組載體CAR?CD244?antiPSMA的制備方法，包括以下步驟：步驟1、將特異性抗體編碼基因使用末端帶有BfuAI限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；所述特異性抗體編碼基因序列為PSMA抗體的部分序列，為序列表序列3；步驟2、將步驟1的PCR產(chǎn)物分別進(jìn)行純化；步驟3、將步驟2純化的PCR產(chǎn)物在BfuAI限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)進(jìn)行單酶切，并同時(shí)將含有改造的CD244骨架的克隆載體在BfuAI限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)進(jìn)行單酶切；步驟4、將酶切后產(chǎn)物進(jìn)行純化；步驟5、將純化后的產(chǎn)物按抗體片段與含有改造的CD244骨架的克隆載體摩爾比為3:1配比后，使用T4連接酶進(jìn)行連接、轉(zhuǎn)化、涂板、挑取單克隆提取質(zhì)粒測(cè)序；將連接正確的質(zhì)粒，命名為：重組載體CAR?CD244?antiPSMA。 |
