環(huán)狀RNA hsa_circ_0008602雙熒光素酶報(bào)告基因載體制備方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202010281350.5 申請日 -
公開（公告）號 CN111500610A 公開（公告）日 2020-08-07
申請公布號 CN111500610A 申請公布日 2020-08-07
分類號 C12N15/65;C12N15/66;C12N15/63 分類 -
發(fā)明人 張夢嬌;袁奕;唐林香;李昂;何勝祥 申請（專利權(quán)）人 江蘇同科醫(yī)藥科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 江蘇同科醫(yī)藥科技有限公司
地址 215000 江蘇省蘇州市蘇州工業(yè)園區(qū)星湖街218號生物納米園A4樓405室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種環(huán)狀RNA hsa_circ_0008602雙熒光素酶報(bào)告基因載體制備方法，步驟(1)，通過cirbase數(shù)據(jù)庫獲取hsa_circ_0008602的全長序列，全基因合成構(gòu)建入pUC57?Amp載體；步驟(2)，設(shè)計(jì)一對同源重組引物，將目的序列從pUC57?Amp載體上擴(kuò)增出來；同時(shí)，對psiCHECK2骨架載體進(jìn)行XhoI和NotI酶切線性化，通過瓊脂糖凝膠對擴(kuò)增產(chǎn)物和酶切產(chǎn)物進(jìn)行純化回收，再將擴(kuò)增產(chǎn)物和酶切產(chǎn)物進(jìn)行同源重組反應(yīng)，得到重組產(chǎn)物；步驟(3)，將重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞中，挑取單克隆進(jìn)行電泳驗(yàn)證和測序鑒定，得到載體psiCHECK2?8602。