CRISPR/Cas9雙靶點靶向敲除目的基因載體構(gòu)建方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202010323098.X 申請日 -
公開（公告）號 CN111471712A 公開（公告）日 2020-07-31
申請公布號 CN111471712A 申請公布日 2020-07-31
分類號 C12N15/85(2006.01)I 分類 -
發(fā)明人 張夢嬌;袁奕;唐林香;李昂;何勝祥 申請（專利權(quán)）人 江蘇同科醫(yī)藥科技有限公司
代理機構(gòu) 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 江蘇同科醫(yī)藥科技有限公司
地址 215000江蘇省蘇州市蘇州工業(yè)園區(qū)星湖街218號生物納米園A4樓405室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 CRISPR/Cas9雙靶點靶向敲除目的基因載體構(gòu)建方法，包括以下步驟：通過以pLenti CRISPR?E載體為基礎(chǔ)，通過在線設(shè)計工具選擇得分較高的靶位點設(shè)計引物，通過退火產(chǎn)生雙鏈DNA，再經(jīng)過連接轉(zhuǎn)化將其構(gòu)建到pLenti CRISPR?E載體上，將載體轉(zhuǎn)入受體細胞后，提取細胞DNA測序驗證挑選出敲除效率較高的兩個靶位點。本發(fā)明以pLenti CRISPR?E載體為骨架，利用同源重組酶的原理，快速構(gòu)建針對目標基因的雙靶點CRISPR表達載體模型，本發(fā)明設(shè)計的雙靶點CRISPR載體系統(tǒng)，可以應用于改造CRISPR單靶點的載體，從而提高打靶效率，實現(xiàn)多基因敲除，有很好的實用價值。??