構(gòu)建細(xì)胞全轉(zhuǎn)錄本擴(kuò)增產(chǎn)物的方法及其應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201711475632.3 申請日 -
公開（公告）號 CN109988825A 公開（公告）日 2019-07-09
申請公布號 CN109988825A 申請公布日 2019-07-09
分類號 C12Q1/6851（2018.01）I; G01N33/574（2006.01）I; G01N33/569（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 郭琦; 王秀莉; 董超; 李長平; 盧孟孟; 宋廷瑞 申請（專利權(quán)）人 杭州蓮和醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京清亦華知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 杭州蓮和醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
地址 310000 浙江省杭州市濱江區(qū)長河街道濱安路688號5幢五層501室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提出了一種構(gòu)建細(xì)胞全轉(zhuǎn)錄本擴(kuò)增產(chǎn)物的方法。該方法包括：將細(xì)胞樣品進(jìn)行磁珠捕獲處理，以便獲得待處理細(xì)胞；以及將所述待處理細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞全轉(zhuǎn)錄本擴(kuò)增，以便獲得所述待處理細(xì)胞的全轉(zhuǎn)錄本擴(kuò)增產(chǎn)物，其中，進(jìn)行單細(xì)胞全轉(zhuǎn)錄本擴(kuò)增之前，進(jìn)一步包括將所述待處理細(xì)胞進(jìn)行裂解處理，所述裂解處理是通過向所述待處理細(xì)胞中加入PBS和裂解液進(jìn)行的，基于1～100個待處理細(xì)胞，所述PBS的用量為7微升，所述裂解液的用量為4微升，所述裂解液包括100mM Tris?HCl、500mM KCl、25mM MgCl2、10％NP40、0.1M DTT、RNA酶抑制劑(40U/μl)、0.5μM UP1引物、2.5mM dNTP以及無核酸酶水。該方法將磁珠捕獲技術(shù)與單細(xì)胞全轉(zhuǎn)錄本擴(kuò)增技術(shù)巧妙相結(jié)合，嚴(yán)格控制待處理細(xì)胞與裂解液和PBS的加入量，可穩(wěn)定獲得微量細(xì)胞(如循環(huán)腫瘤細(xì)胞)全轉(zhuǎn)錄本擴(kuò)增產(chǎn)物。