布氏錐蟲苯丙氨酰tRNA合成酶的制備方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN200910056686.5 申請日 -
公開（公告）號 CN101633915B 公開（公告）日 2011-06-08
申請公布號 CN101633915B 申請公布日 2011-06-08
分類號 C12N9/00(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 姚瓔;杲光偉;李大偉 申請（專利權）人 泰州新生源生物醫(yī)藥有限公司
代理機構(gòu) 上海交達專利事務所 代理人 上海交通大學;泰州新生源生物醫(yī)藥有限公司
地址 200240 上海市閔行區(qū)東川路800號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種生物技術領域的酶的布氏錐蟲苯丙氨酰tRNA合成酶的制備方法，具體步驟如下：分別設計引物，擴增布氏錐蟲苯丙氨酸t(yī)RNA合成酶的α亞基和β亞基基因；將α亞基和β亞基基因分別克隆到原核表達載體pET21a(+)中，構(gòu)建pET21a(+)-PheRSα及pET21a(+)-PheRSβ表達載體；將α亞基的操縱子亞克隆到pET21a(+)-PheRSβ中，形成重組共表達載體pET21a(+)-PheRSαβ；將重組共表達載體pET21a(+)-PheRSαβ轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)RIPL中，IPTG誘導表達；收集裂解后的菌液上清，純化蛋白，得布氏錐蟲苯丙氨酰tRNA合成酶。本發(fā)明構(gòu)建布氏錐蟲苯丙氨酸t(yī)RNA合成酶(PheRS)的重組質(zhì)粒，表達純化出布氏錐蟲苯丙氨酸t(yī)RNA合成酶蛋白，為抗寄生蟲藥物的篩選奠定了基礎。