一種表達(dá)木酮糖激酶基因的質(zhì)粒的構(gòu)建方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN200810064831.X 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN101302535B 公開（公告）日 2010-10-20
申請(qǐng)公布號(hào) CN101302535B 申請(qǐng)公布日 2010-10-20
分類號(hào) C12N15/66(2006.01)I;C12N15/54(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 平文祥;葛菁萍;凌宏志;宋剛;杜春梅;趙丹;高冬妮;曹喜生 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 南通國邦科技發(fā)展有限公司
代理機(jī)構(gòu) 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 代理人 單軍
地址 150080 黑龍江省哈爾濱市南崗區(qū)學(xué)府路74號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種表達(dá)木酮糖激酶基因的質(zhì)粒的構(gòu)建方法，它涉及一種質(zhì)粒載體的構(gòu)建方法。它解決了目前經(jīng)代謝工程改造后的釀酒酵母木糖利用率仍然很低，且發(fā)酵副產(chǎn)物木糖醇產(chǎn)生量高的問題。構(gòu)建方法：先克隆KanR基因、XKS1基因、ADH1終止子片段、釀酒酵母中2.2kb?rDNA片段；然后回收、純化基因片段與pGEMT?Easy載體連接；再依次構(gòu)建質(zhì)粒pR、質(zhì)粒pRK和質(zhì)粒pRKT；最后將2.2kb?rDNA片段加入質(zhì)粒pRKT。本發(fā)明方法所構(gòu)建的載體可以將XKS1基因高拷貝整合到釀酒酵母的染色體基因組上，實(shí)現(xiàn)XKS1的超量穩(wěn)定表達(dá)，疏通了釀酒酵母利用木糖產(chǎn)乙醇的木糖代謝流，提高了木糖的利用率，降低了副產(chǎn)物木糖醇的產(chǎn)量。