多重?cái)U(kuò)增子測(cè)序用引物系統(tǒng)、其應(yīng)用以及測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201710814297.9 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN109486923B 公開(kāi)（公告）日 2022-02-18
申請(qǐng)公布號(hào) CN109486923B 申請(qǐng)公布日 2022-02-18
分類號(hào) C12Q1/6869（2018.01）I;C12N15/11（2006.01）I;C40B50/06（2006.01）I;C12N15/10（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 羅景燕;唐毅;何廣良;林釗;李偉琴;許少飛;賴炳權(quán);周艷河 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 廣州永諾生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 代理人 林青中;萬(wàn)志香
地址 510300廣東省廣州市開(kāi)發(fā)區(qū)廣州國(guó)際生物島螺旋三路6號(hào)第四層
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開(kāi)了一種多重?cái)U(kuò)增子測(cè)序用引物系統(tǒng)、其應(yīng)用及測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建方法。該引物系統(tǒng)包括第一輪反向特異性引物組和第二輪正向特異性引物組。其中第一輪反向特異性引物組包括多個(gè)不同的第一輪反向特異性引物，每個(gè)所述反向特異性引物從5’端至3’端分別為反向接頭序列、條形碼序列和反向特異性序列。分子條形碼序列提供了一種很好的方法來(lái)跟蹤錯(cuò)配，利用下游分析，聚合酶在PCR過(guò)程中產(chǎn)生的錯(cuò)配可以與原始分子中出現(xiàn)的序列變異區(qū)分開(kāi)來(lái)，最后通過(guò)去除低水平的假陽(yáng)性來(lái)提高1％或更低的突變的檢測(cè)準(zhǔn)確率。通過(guò)計(jì)算讀數(shù)中唯一的分子條形碼序列數(shù)量，而不是計(jì)算總讀數(shù)的數(shù)量，也可以更好地實(shí)現(xiàn)目標(biāo)量化，因?yàn)榭傋x數(shù)更有可能被非均一性擴(kuò)增的所誤讀。