一種用于檢測(cè)單個(gè)CAR-T細(xì)胞的慢病毒載體拷貝數(shù)的方法及其應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN202210406094.7 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN114686576A 公開(kāi)（公告）日 2022-07-01
申請(qǐng)公布號(hào) CN114686576A 申請(qǐng)公布日 2022-07-01
分類號(hào) C12Q1/686（2018.01）I;C12N15/11（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張同存;張琴星 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 武漢科技大學(xué)
代理機(jī)構(gòu) 武漢紅觀專利代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 -
地址 430000湖北省武漢市和平大道947號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提出了一種用于檢測(cè)單個(gè)CAR?T細(xì)胞的慢病毒載體拷貝數(shù)的方法，包括如下步驟：S1，以β?globin為內(nèi)參基因，設(shè)計(jì)β?globin的qPCR引物和探針，利用β?globin的質(zhì)粒模板建立標(biāo)準(zhǔn)曲線1；S2，設(shè)計(jì)目的基因的引物和探針，利用目的基因的質(zhì)粒模板建立標(biāo)準(zhǔn)曲線2；S3，分別使用β?globin和目的基因的qPCR引物對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從標(biāo)準(zhǔn)曲線1上計(jì)算出待測(cè)樣本的β?globin拷貝數(shù)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線2上計(jì)算出待測(cè)樣品的CAR拷貝數(shù)，然后根據(jù)公式計(jì)算出目的基因相對(duì)細(xì)胞數(shù)的拷貝數(shù)。本發(fā)明以β?globin為內(nèi)源參照基因，能夠穩(wěn)定且有效地檢測(cè)出整合入CAR?T細(xì)胞基因組中整合的病毒載體拷貝數(shù)，且能夠換算成平均每個(gè)CAR?T細(xì)胞基因組中整合的病毒載體拷貝數(shù)。