一種TTK酶活性的快速檢測方法及其應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201910486152.X 申請日 -
公開（公告）號 CN110129410A 公開（公告）日 2019-08-16
申請公布號 CN110129410A 申請公布日 2019-08-16
分類號 C12Q1/48 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 石榴;徐燕華 申請（專利權(quán)）人 武漢合研生物醫(yī)藥科技有限公司
代理機構(gòu) 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 馮子玲
地址 430000 湖北省武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)高新大道666號生物創(chuàng)新園B1棟二樓B274-12室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種TTK酶活性的快速檢測方法及其應(yīng)用，檢測方法為：(1)取待測樣品、空白對照、陽性對照分別與TTK酶、MBP蛋白/ATP混合液共孵育產(chǎn)生ADP；(2)向三組激酶反應(yīng)體系中分別添加ADP?GloTM反應(yīng)試劑共孵育，終止激酶反應(yīng)并消耗完剩余ATP；(3)向三組反應(yīng)體系中分別添加激酶檢測試劑共孵育，使ADP轉(zhuǎn)化成ATP，讀取新合成的ATP的發(fā)光值RLU；(4)按酶活＝(RLU(Sample)?RLU(Blank))/(RLU(Pos.Ctrl)?RLU(Blank))×100％計算TTK酶活。該方法基于ADP?GloTM激酶實驗，直接測定反應(yīng)中消耗的ATP來定量反應(yīng)進程。反應(yīng)在384孔板中進行，不涉及反復(fù)吸出和洗板過程，操作誤差小，同時增加了通量，適用于結(jié)合高通量移液工作站設(shè)備進行大量微孔板操作。該方法體系穩(wěn)定，準確度高，可用于TTK靶點抑制劑和TTK靶點相關(guān)藥物的篩選。