一種TGFβR1（T204D）酶活性的快速檢測(cè)方法及其應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201910485810.3 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN110196326A 公開(kāi)（公告）日 2019-09-03
申請(qǐng)公布號(hào) CN110196326A 申請(qǐng)公布日 2019-09-03
分類(lèi)號(hào) G01N33/573（2006.01）I 分類(lèi) 測(cè)量；測(cè)試;
發(fā)明人 石榴; 徐燕華 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人 武漢合研生物醫(yī)藥科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 馮子玲
地址 430000 湖北省武漢市東湖新技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)高新大道666號(hào)生物創(chuàng)新園B1棟二樓B274-12室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明屬于生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種TGFβR1(T204D)酶活性的快速檢測(cè)方法及其應(yīng)用。檢測(cè)方法為：(1)取待測(cè)樣品、空白對(duì)照品、陽(yáng)性對(duì)照品分別與TGFβR1(T204D)酶、TGFβR1底物/ATP混合液共孵育進(jìn)行激酶反應(yīng)產(chǎn)生ADP；(2)向步驟(1)的三組激酶反應(yīng)體系中分別添加ADP?GloTM反應(yīng)試劑共孵育，終止激酶反應(yīng)并消耗完剩余ATP；(3)向步驟(2)的三組反應(yīng)體系中分別添加激酶檢測(cè)試劑共孵育，使ADP轉(zhuǎn)化成ATP，并讀取新合成的ATP的發(fā)光值RLU；(4)按酶活＝(RLU(Sample)?RLU(Blank))/(RLU(Pos.Ctrl)?RLU(Blank))×100％計(jì)算TGFβR1(T204D)酶活。該方法基于A(yíng)DP?GloTM激酶實(shí)驗(yàn)，直接測(cè)定反應(yīng)中消耗的ATP來(lái)定量反應(yīng)的進(jìn)程。完成全部實(shí)驗(yàn)只需一天，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間。該方法可應(yīng)用于TGFβR1(T204D)受體抑制劑和此靶點(diǎn)相關(guān)的抗腫瘤藥物的篩選。