一種得到雷公藤甲素的肝微粒體體外代謝產(chǎn)物的實驗方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202110890893.1 申請日 -
公開（公告）號 CN113804776A 公開（公告）日 2021-12-17
申請公布號 CN113804776A 申請公布日 2021-12-17
分類號 G01N30/02（2006.01）I;G01N30/06（2006.01）I;G01N30/34（2006.01）I;G01N30/72（2006.01）I 分類 測量；測試;
發(fā)明人 彭冉;楊林青;周昕琪;于海勤;孔娟 申請（專利權(quán)）人 山東晶輝生物技術(shù)有限公司
代理機構(gòu) 濟南泉城專利商標事務(wù)所 代理人 張貴賓
地址 274000山東省菏澤市牡丹區(qū)延河路505號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供一種得到雷公藤甲素的肝微粒體體外代謝產(chǎn)物的實驗方法，包括以下步驟：S1：制備大鼠肝微粒體；S2：將步驟1中制備的5μL肝微粒體，2μL的0.2mg/mL雷公藤甲素，20μL NADPH系統(tǒng)和0.05mM Tris/HCl組合，最終構(gòu)成體積為200μL的微粒體體系；S3：將上述肝微粒體體系進行溫孵，溫孵時間點為0，15，60，90，120分鐘；S4：取100μL步驟3中的溫孵液加入10μL含1μg/mL的內(nèi)標溶液，沉淀蛋白后，以12000rpm離心5分鐘，取上清進行LC?MS/MS的定量分析，進樣量1μL；S5：剩余溫孵液加入3倍體積的冷乙腈，12000rpm離心5分鐘后，取全部上清于氮氣條件下常溫吹干，以100μL的甲醇：水，體積比為1：1復(fù)溶，用于代謝產(chǎn)物鑒定。