一種高通量檢測(cè)蛋白相互作用的方法及其應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201310157873.9 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN103361417B 公開（公告）日 2015-04-08
申請(qǐng)公布號(hào) CN103361417B 申請(qǐng)公布日 2015-04-08
分類號(hào) C12Q1/68(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 松陽洲 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 廣州美格生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 廣州市越秀區(qū)哲力專利商標(biāo)事務(wù)所（普通合伙） 代理人 廣州美格生物科技有限公司
地址 510000 廣東省廣州市番禺區(qū)廣州國(guó)際生物島螺旋三路一號(hào)辦公區(qū)第二層210單位
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種高通量檢測(cè)活細(xì)胞內(nèi)蛋白相互作用的方法，以逆轉(zhuǎn)錄病毒為基礎(chǔ)的BiFC系統(tǒng)，分別將“誘餌”蛋白cDNA克隆入含YFPn的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體，而將18000個(gè)人類基因?cDNA分別克隆入含YFPc的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體，通過逆轉(zhuǎn)錄病毒感染，產(chǎn)生同時(shí)穩(wěn)定表達(dá)待篩選基因-YFPc融合蛋白和“誘餌”蛋白-YFPn融合蛋白的細(xì)胞，如果“誘餌”蛋白能與目標(biāo)蛋白相互作用，通過流式細(xì)胞儀在FITC波長(zhǎng)將觀察到發(fā)熒光的細(xì)胞并能檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)弱。本發(fā)明用于篩選在刺激或非刺激條件下與目的蛋白相互作用的蛋白網(wǎng)絡(luò)，可檢測(cè)較弱或瞬時(shí)相互作用，信噪比高，假陽性率低，靈敏度高。