一種高通量檢測(cè)活細(xì)胞內(nèi)SUMO修飾底物的方法及其應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201511020132.1 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN105463053A 公開(kāi)（公告）日 2016-04-06
申請(qǐng)公布號(hào) CN105463053A 申請(qǐng)公布日 2016-04-06
分類號(hào) C12Q1/02(2006.01)I;C12N15/867(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 任間;趙齊;蔣帥 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 廣州美格生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 代理人 廣州美格生物科技有限公司
地址 510000 廣東省廣州市國(guó)際生物島螺旋四路1號(hào)辦公區(qū)第二層210單元
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開(kāi)了一種高通量檢測(cè)活細(xì)胞內(nèi)SUMO修飾底物的方法及其應(yīng)用，該法基于BiFC系統(tǒng)，構(gòu)建SUMO1、SUMO2/3的C端或N端連接YFPn的逆轉(zhuǎn)錄表達(dá)載體，將待檢測(cè)對(duì)象的多個(gè)基因的cDNA克隆入含有YFPc的逆轉(zhuǎn)錄表達(dá)載體；病毒感染后，將同時(shí)穩(wěn)定表達(dá)融合蛋白：SUMO-YFPn和待篩選蛋白-YFPc。如果是發(fā)生相互作用的蛋白，則可在FITC波長(zhǎng)下觀察到熒光信號(hào)，即篩選出活細(xì)胞內(nèi)SUMO的修飾底物。該法可同時(shí)篩選SUMO1/2/3發(fā)生共價(jià)修飾和非共價(jià)修飾的蛋白底物，以及篩選在刺激和非刺激下SUMO共價(jià)或非共價(jià)修飾底物的結(jié)合情況，可篩選SUMO弱結(jié)合的蛋白底物，信噪比、靈敏度高，假陽(yáng)性低。