一種基于數(shù)字PCR平臺(tái)的EGFR基因擴(kuò)增的檢測(cè)方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN202011458578.3 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN112430646A 公開（公告）日 2021-03-02
申請(qǐng)公布號(hào) CN112430646A 申請(qǐng)公布日 2021-03-02
分類號(hào) C12Q1/6851;C12N15/11 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 楊春燕;段小紅;楊文娟;丁蕊;張騰龍;周啟明 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 南京求臻基因科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 重慶百潤洪知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 姚瓊斯
地址 210000 江蘇省南京市江北新區(qū)浦濱路211號(hào)揚(yáng)子科創(chuàng)中心一期A棟9樓
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是指一種基于數(shù)字PCR平臺(tái)的EGFR基因擴(kuò)增的檢測(cè)方法，包括如下步驟：S1，cfDNA的提?。禾崛〈郎y(cè)樣本的cfDNA，所述待測(cè)樣本為全血樣本；S2，制備數(shù)字PCR反應(yīng)混合液：將待測(cè)樣本cfDNA模板、EGFR基因擴(kuò)增區(qū)域正向和反向擴(kuò)增引物、EGFR基因擴(kuò)增區(qū)域TaqMan探針、內(nèi)參基因EFTUD2正向和反向擴(kuò)增引物、內(nèi)參基因EFTUD2標(biāo)記TaqMan探針以及ddPCR反應(yīng)預(yù)混液混合，制備得到數(shù)字PCR反應(yīng)混合液，所述cfDNA模板的含量為0.5～2ng/μL；S3，將步驟S2中得到的PCR反應(yīng)混合液加載到數(shù)字PCR芯片中，進(jìn)行ddPCR擴(kuò)增反應(yīng)；S4，PCR芯片熒光信號(hào)讀??；S5，數(shù)據(jù)分析和結(jié)果統(tǒng)計(jì)。本發(fā)明靈敏度高，操作簡單，無需采集組織標(biāo)本，有效減少了病人的痛苦，特別適合對(duì)組織取樣不耐受的患者。