一種藻紅蛋白(PE)與Annexin V蛋白偶聯(lián)方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN202011149769.1 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN112745378A 公開(kāi)（公告）日 2021-05-04
申請(qǐng)公布號(hào) CN112745378A 申請(qǐng)公布日 2021-05-04
分類(lèi)號(hào) C07K14/47;C07K1/10;C07K1/22;C07K1/16;C12N15/70 分類(lèi) 有機(jī)化學(xué)〔2〕;
發(fā)明人 郭愛(ài)龍 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人 杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司
代理機(jī)構(gòu) 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 周瓊
地址 310000 浙江省杭州市拱墅區(qū)祥茂路36號(hào)B樓3樓A、B、C區(qū)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開(kāi)了一種藻紅蛋白(PE)與AnnexinV蛋白偶聯(lián)方法，包括以下步驟：步驟1：AnnexinV蛋白表達(dá)純化：1.1：基因序列優(yōu)化：查找人AnnexinV蛋白的基因序列，將人AnnexinV基因序列優(yōu)化，去除終止密碼子序列，將其連入原核表達(dá)載體pET28a上，保留前后His標(biāo)簽蛋白，為蛋白純化及后續(xù)偶聯(lián)熒光素純化做準(zhǔn)備；1.2：AnnexinV蛋白誘導(dǎo)表達(dá)：挑取pET28a?AnnexinV質(zhì)粒單菌落，接種到10ml含有50μg/ml卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中，37℃200rpm振蕩培養(yǎng)過(guò)夜，按照1：100將培養(yǎng)的菌液接種到含50μg/ml卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中，37℃200rpm振蕩培養(yǎng)至菌液濃度OD600為04?0.6；本發(fā)明先通過(guò)分子篩純化去除大部分游離的PE后再采用鎳柱純化濃縮，得到純度較高的AnnexinV?PE標(biāo)記物，且保持蛋白良好的生物活性，可用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)。