重組T4連接酶突變體、編碼DNA及NGS建庫(kù)方法
基本信息
| 申請(qǐng)?zhí)?/td> | CN202111336097.X | 申請(qǐng)日 | - |
| 公開(kāi)（公告）號(hào) | CN113774032B | 公開(kāi)（公告）日 | 2022-03-01 |
| 申請(qǐng)公布號(hào) | CN113774032B | 申請(qǐng)公布日 | 2022-03-01 |
| 分類號(hào) | C12N9/00（2006.01）I;C12N15/52（2006.01）I;C12Q1/6806（2018.01）I;C40B50/06（2006.01）I | 分類 | 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程; |
| 發(fā)明人 | 宋東亮;陳晶晶;江翱;孫睿;侯策;王嫚;劉倩;曹振 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 | 翌圣生物科技（上海）股份有限公司 |
| 代理機(jī)構(gòu) | 蘇州根號(hào)專利代理事務(wù)所（普通合伙） | 代理人 | 朱華慶 |
| 地址 | 200120上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號(hào)樓402室 | ||
| 法律狀態(tài) | - | ||
摘要
| 摘要 | 本發(fā)明在野生型T4DL的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了Q19K、L63T、E88R、P127K、K159S、K225A、F233A、A237R、D371W、E440K、T451K、D452P多個(gè)點(diǎn)突變；在突變體的兩端包含兩個(gè)雙鏈DNA結(jié)合域；雙鏈DNA結(jié)合域與T4DL之間的連接使用多肽橋。最終獲得了一系列低偏好性和高效率的重組DNA連接酶突變體T4DLm。并公開(kāi)了其編碼DNA和NGS建庫(kù)方法。T4DLm在平末端連接上具有顯著的優(yōu)勢(shì)，連接效率高達(dá)95%，且偏好性極低。利用T4DLm開(kāi)發(fā)了高效簡(jiǎn)便的新型NGS建庫(kù)技術(shù)，具有耗時(shí)短、文庫(kù)產(chǎn)量更高、均一性更好、文庫(kù)自連更低、捕獲測(cè)序數(shù)據(jù)覆蓋深度更好等明顯的優(yōu)勢(shì)，非常適用于臨床樣本的NGS檢測(cè)，尤其是腫瘤樣本的檢測(cè)。 |
