一種單細(xì)胞RNA逆轉(zhuǎn)錄與文庫(kù)構(gòu)建的方法
基本信息
| 申請(qǐng)?zhí)?/td> | CN201810019044.7 | 申請(qǐng)日 | - |
| 公開(kāi)（公告）號(hào) | CN108103055B | 公開(kāi)（公告）日 | 2021-05-28 |
| 申請(qǐng)公布號(hào) | CN108103055B | 申請(qǐng)公布日 | 2021-05-28 |
| 分類(lèi)號(hào) | C40B50/06(2006.01)I;C12Q1/6806(2018.01)I;C12Q1/6869(2018.01)I;C12N15/10(2006.01)I | 分類(lèi) | - |
| 發(fā)明人 | 胡春旭;陸思嘉;任軍 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人 | 上海億康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司 |
| 代理機(jī)構(gòu) | 北京市中咨律師事務(wù)所 | 代理人 | 張莉;黃革生 |
| 地址 | 215123 江蘇省蘇州市蘇州工業(yè)園區(qū)星湖街218號(hào)生物納米園B7樓201單元 | ||
| 法律狀態(tài) | - | ||
摘要
| 摘要 | 本發(fā)明屬于轉(zhuǎn)錄組分析領(lǐng)域，涉及到一種快速進(jìn)行單細(xì)胞RNA逆轉(zhuǎn)錄與文庫(kù)構(gòu)建的方法。本發(fā)明能在5?6小時(shí)內(nèi),由1?2000個(gè)細(xì)胞或10pg?20ng經(jīng)提取的真核生物總RNA為起始，擴(kuò)增出20?500ng高質(zhì)量全長(zhǎng)雙鏈cDNA，并獲得符合下游分析要求的高質(zhì)量cDNA文庫(kù)。此發(fā)明有效避免了cDNA合成過(guò)程中的3’偏好性和基因組DNA的污染，表達(dá)定量分子標(biāo)簽可輔助基因表達(dá)量計(jì)算，同時(shí)在完整擴(kuò)增RNA序列信息的同時(shí)該表達(dá)定量分子標(biāo)簽還可保留鏈來(lái)源信息。本發(fā)明可獲得95％以上的逆轉(zhuǎn)錄與擴(kuò)增建庫(kù)成功率，cDNA文庫(kù)可無(wú)縫銜接Illumina主流測(cè)序平臺(tái)，下機(jī)數(shù)據(jù)(5M Reads)可檢測(cè)到90％以上的基因表達(dá)，基因表達(dá)一致性超過(guò)90％，擴(kuò)增無(wú)明顯偏倚，且需要的樣本投入量更少。?? |
