一種NK細(xì)胞的無血清培養(yǎng)方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201810124169.6 申請日 -
公開（公告）號 CN108300694B 公開（公告）日 2018-07-20
申請公布號 CN108300694B 申請公布日 2018-07-20
分類號 C12N5/0783(2010.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 李杰;劉振云;徐華棟;王維;程豐偉 申請（專利權(quán)）人 蘇州一兮生物技術(shù)有限公司
代理機(jī)構(gòu) 合肥市浩智運(yùn)專利代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 安徽古一生物科技有限公司;合肥一兮生物科技有限公司
地址 238000安徽省合肥市巢湖市經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)管委會南三樓301室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種NK細(xì)胞的無血清培養(yǎng)方法，包括如下步驟：(1)從外周血分離單個核細(xì)胞，重懸于無血清培養(yǎng)基中，調(diào)整單個核細(xì)胞濃度，培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)過夜；(2)第2天，從培養(yǎng)液中吸出懸浮細(xì)胞，接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶，補(bǔ)加無血清培養(yǎng)基，同時添加抗CD16抗體、IL2和IL3；第4天，補(bǔ)加無血清培養(yǎng)基，添加IL2、IL3，繼續(xù)培養(yǎng)至第6天；(3)第7天，補(bǔ)加無血清培養(yǎng)基，添加IL15、α?半乳糖神經(jīng)酰胺，繼續(xù)培養(yǎng)至第14天；(4)離心收集NK細(xì)胞，使用流式抗體鑒定NK細(xì)胞表型。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：采用無血清培養(yǎng)方法，通過14天的體外培養(yǎng)，獲得90％純度以上、擴(kuò)增倍數(shù)80倍以上的NK細(xì)胞。??