一種具有高效同源定向修復活性Cas9-RNAiRNP的制備方法及應用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202210216005.2 申請日 -
公開（公告）號 CN114672504A 公開（公告）日 2022-06-28
申請公布號 CN114672504A 申請公布日 2022-06-28
分類號 C12N15/70（2006.01）I;C12N15/55（2006.01）I;C12N15/113（2010.01）I;C12N9/22（2006.01）I;C12N15/88（2006.01）I 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 劉奕;孫文麗;吳克;殷文浩;喬潔 申請（專利權(quán)）人 武漢博沃生物科技有限公司
代理機構(gòu) 湖南喬熹知識產(chǎn)權(quán)代理事務所（普通合伙） 代理人 -
地址 430075湖北省武漢市東湖高新區(qū)高新大道858號生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)園中小企業(yè)園A9-2棟
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種具有高效同源定向修復活性Cas9?RNAi RNP的制備方法，其中，選擇對NHEJ途徑的關(guān)鍵蛋白Ligase 4進行短暫抑制，通過延長Cas9RNP的gRNA的3′端以構(gòu)建shRNA的類似結(jié)構(gòu)，利用大腸桿菌細胞“一步法”表達Cas9RNP技術(shù)，得到攜帶特定sgRNA?shRNA的Cas?RNAi RNP。本發(fā)明的Cas?RNAi RNP實現(xiàn)了基因編輯與RNA干擾的功能聯(lián)用，設計針對Ligase 4基因的shRNA堿基序列，以期對NHEJ途徑進行暫時抑制，從而實現(xiàn)高效的HDR修復。