一種自殺他殺式質(zhì)粒、利用其的釀酒酵母無痕基因編輯方法及應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202010456216.4 申請日 -
公開（公告）號 CN111471720A 公開（公告）日 2020-07-31
申請公布號 CN111471720A 申請公布日 2020-07-31
分類號 C12N15/90(2006.01)I 分類 -
發(fā)明人 朱佑民;陶小倩;程倩;王梓旭;邢妍婧;趙一凡;柳偉強;楊平 申請（專利權(quán)）人 蘇州泓迅生物科技股份有限公司
代理機構(gòu) 北京品源專利代理有限公司 代理人 蘇州泓迅生物科技股份有限公司
地址 215123江蘇省蘇州市蘇州工業(yè)園區(qū)星湖街218號生物納米園C20棟
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供一種自殺他殺式質(zhì)粒、利用其的釀酒酵母無痕基因編輯方法及應(yīng)用。所述自殺他殺式質(zhì)粒包括復(fù)制起點、篩選標(biāo)記、Cas9蛋白表達框和sgRNA1表達框；所述sgRNA1表達框包含啟動子、針對基因編輯載體和所述自殺他殺式質(zhì)粒的共同序列設(shè)計的sgRNA1、scaffold和終止序列。將基因編輯載體轉(zhuǎn)入釀酒酵母中，再轉(zhuǎn)入所述自殺他殺式質(zhì)粒，即可得到無痕編輯后的釀酒酵母菌株。利用所述自殺他殺式質(zhì)粒編輯釀酒酵母，既不影響基因編輯后對成功轉(zhuǎn)化基因編輯質(zhì)粒的菌株進行選擇，又顯著提高了消除質(zhì)粒成功率；同時，經(jīng)過兩輪質(zhì)粒轉(zhuǎn)化即可達到無痕編輯的效果，進一步加快了釀酒酵母無痕編輯的速率。??