一種基于熒光素酶報告病毒的自噬細(xì)胞系構(gòu)建方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201811611086.6 申請日 -
公開（公告）號 CN109576227A 公開（公告）日 2019-04-05
申請公布號 CN109576227A 申請公布日 2019-04-05
分類號 C12N5/10（2006.01）I; C12N15/867（2006.01）I; C12N15/65（2006.01）I; C12N15/66（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 王雪根; 呂惠敏; 季雨 申請（專利權(quán)）人 江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京精金石知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 強(qiáng)紅剛
地址 210008 江蘇省南京市江寧區(qū)江寧科學(xué)園芝蘭路18號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供了一種基于熒光素酶報告病毒的自噬細(xì)胞系構(gòu)建方法，該方法將AGT7啟動子序列及LUC2基因整合入GTP載體上，并對該載體進(jìn)行慢病毒包裝，轉(zhuǎn)染進(jìn)入293T細(xì)胞，經(jīng)抗性篩選，獲得陽性細(xì)胞；利用超高速離心機(jī)濃縮獲得高滴度的慢病毒。在此基礎(chǔ)上，采用慢病毒侵染不同種類的細(xì)胞，通過熒光顯微鏡觀察病毒轉(zhuǎn)染效率，并通過基因檢測驗(yàn)證侵染的細(xì)胞系中目的基因的表達(dá)。該方法構(gòu)建的自噬相關(guān)的細(xì)胞系有助于研究化合物對細(xì)胞自噬的影響，為發(fā)育、衰老、細(xì)胞程序性死亡提供了新的研究思路和解決方案。